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        标准菌株的活化方法

        作者:必威体育浏览次数:27 日期:2019-12-12 11:09:44

        标准菌株的活化方法

        实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株,除检测方法(如药物敏感试验、抗菌性能测试)中规定的菌株外,

        还应包括应用于培养基(试剂)验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。

        并且标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得。               

        ▲CNAS-CL09-2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》

        常用标准菌种来源

        美国菌种保藏中心ATCC

        英国国家典型菌株保藏中心NCTC

        中国医学细菌保藏管理中心CMCC

        中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC

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        ▲ ATCC和CICC标准菌种的常见包装形式

        接下来一起了解下标准菌株的活化方法

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        ATCC标准菌种KWIK-STIKTM产品的活化说明

        将KWIK-STIKTM产品平衡至室温,撕开袋子。取出菌种管,揭下标签上可撕取部分,贴于原始培养皿或QC记录本上。

        捏碎管帽处的安瓿,使其释放出液体,将管子直立以使液体流入管底。挤压管底的菌球,使之与液体混合,以形成均匀的菌悬液。

        将棉签浸于菌悬液中,并于培养皿约三分之一范围内轻轻挤压并旋转涂抹。使用无菌接种环进行三区或四区划线,以尽可能分离出单菌落。

        随即在适合的温度和条件下倒置培养已接种的原始培养皿。按照适宜的生物危害品处置方法(如121℃高压30 min),丢弃菌种管。

        详情请参阅北京陆桥官方网站资料下载区标准菌种活化官方说明

         

         

        ▲ ATCC标准菌株KWIK-STIKTM产品操作说明

        CICC标准菌种的操作说明

        使用酒精棉球擦拭冻干菌种管表面进行消毒。将冻干管顶端置于酒精灯火焰上均匀加热约1~2分钟。

        立即滴2~3滴无菌水于加热部位,使管壁破裂。使用镊子或剪刀敲击裂痕处,将管顶端敲落。吸取约0.5mL液体培养基于冻干管中,将冻干菌粉充分溶解。

        取0.2mL菌悬液转移至装有5mL~8mL液体培养基的试管中混匀,并取0.1mL菌悬液转移至平板培养基上,进行划线分离。

        将液体培养基和平板培养基置于合适条件下培养。

        按照适宜的生物危害品处置方法(如121℃高压30 min),丢弃菌种管。

        注:也可使用砂轮在冻干管顶端打磨出裂痕,再使用镊子或剪刀将管顶端敲落。

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        ▲ CICC标准菌株的打管方式

        菌株活化用培养基的选择

        标准菌株的活化需使用非选择性(不含任何抑菌成分),且营养富集的培养基,固体培养基和液体培养基建议同时使用,

        固体培养基上更易观察到菌种的形态、纯度,液体培养基更利于菌种的复苏和增殖,在特定条件下培养以优化菌株的生长和回收,

        常见菌种活化培养基见表1和表2。

        微生物培养温度

        绝大多数微生物为嗜中温,推荐培养温度为36℃±1℃;

        嗜冷菌(如小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等)推荐培养温度25℃~30℃;

        嗜热菌(如嗜热脂肪芽孢杆菌)推荐培养温度55℃~65℃。

        微生物氧气条件

        绝大多数微生物为兼性厌氧菌,正常环境培养;

        厌氧菌(如双歧杆菌属、梭菌属)需在厌氧环境下培养;

        微需氧菌(如弯曲杆菌属)需在微需氧环境下培养。

        厌氧和微需氧培养需要配备培养罐、厌氧(或微需氧)产气袋和氧气指示剂。厌氧(或微需氧)产气袋为一次性产品,

        培养罐开启后需更换产气袋。陆桥代理进口品牌三菱瓦斯、OXOID和BD产品。

         

        ▲ 日本三菱产气袋和培养罐

        培养时间

        将菌液接种到平板和肉汤中,在合适的温度和氧气条件下培养,一般细菌需要培养24h~48h,霉菌培养3d~5d。

        生物安全

        实验室的生物安全防护级别应与其拟从事的试验活动相适应。

        沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等第三类病原微生物,必须在二级生物安全柜中操作,确保生物安全!

         

         

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